محیط کلیگر آیرون آگار زیست رویش Zist Royesh Kligler’s Iron Agar (KIA) 16x100mm

الف/ ارگانیسم‌های تخمیر کننده غیر لاکتوز در محیط کشت KIA

اگر محیط کشت کلیگر آیرون آگار با یک ارگانیسم تخمیر کننده گلوکز تلقیح شود که نمی‌تواند از لاکتوز استفاده کند، فقط مقدار نسبتا کمی اسید در محیط کشت ایجاد می‌شود. در ابتدا، در طی 8 تا 12 ساعت اول انکوباسیون، حتی این مقدار کم اسید ممکن است باعث تغییر رنگ هر دو قسمت آگار (هم قسمت مایل و هم قسمت عمیق) به رنگ زرد شود.

با این حال، ظرف چند ساعت بعد، ذخایر گلوکز به طور کامل تمام می‌شود و باکتری‌ها شروع به تخریب اکسیداتیو اسیدهای آمینه در قسمت مایل آگار می‌کنند. این منجر به آزاد شدن آمین‌هایی می‌شود که مقادیر اسید موجود در قسمت مایل را خنثی می‌کنند. طی 18 تا 24 ساعت، کل قسمت مایل به pH قلیایی باز می‌گردد و رنگ آن مجددا قرمز می‌شود.

اما، در قسمت عمیق (بخش بی هوازی) لوله، تخریب اسید آمینه برای مقابله با اسید تشکیل شده کافی نیست. بنابراین قسمت عمیق لوله، زرد باقی می‌ماند.

ب/ ارگانیسم‌های تخمیر کننده لاکتوز در محیط کشت KIA

اگر محیط کشت کلیگر آیرون آگار با ارگانیسم تخمیر کننده لاکتوز تلقیح شود، در صورت تمام شدن منبع گلوکز، بازهم تخمیر ادامه می‌یابد. زیرا ارگانیسم قادر به استفاده از لاکتوز  است که غلظت آن در محیط کشت KIA ،حدودا 10 برابر بیشتر از گلوکز است.

در نتیجه، هنگامی که لوله در پایان 18 تا 24 ساعت بررسی می‌شود، تولید اسید از تخمیر لاکتوز همچنان در حال وقوع است. بنابراین هر دو سطح مایل و عمیق زرد به نظر می‌رسند.

بررسی نتایج محیط کشت کلیگر آیرون آگار

باکتری‌هایی که روی محیط کشت KIA رشد می‌کنند سه نوع واکنش کلی ایجاد می‌کنند:

۱. محیط کشت بدون تغییر: در این حالت قسمت شیب، قلیایی/قلیایی (K/K) است. در واقع تخمیر کربوهیدرات اتفاق نمی‌افتد. این امر نشان‌دهنده‌ی وجود باسیل‌های گرم منفی غیر تخمیری در محیط کشت است. یعنی جاندارانی که قادر به تولید اسید از تخمیر گلوکز یا لاکتوز نیستند. مانند سودوموناس آئروژینوزا.

۲. تخمیر کننده غیر لاکتوز: در این حالت قسمت شیب، قلیایی / اسیدی (K/A) است. یعنی  گلوکز تخمیر می‌شود اما لاکتوز تخمیر نمی‌گردد. این ویژگی برای باکتری‌های غیر تخمیر کننده لاکتوز، مانند گونه‌های شیگلا صدق می‌کند. در ابتدا، تخمیر گلوکز ، هر دو قسمت عمیق و مایل محیط را اسیدی می‌کند. اما در نهایت قسمت مایل به pH قلیایی برمی‌گردد.

۳. تخمیر کننده لاکتوز: در این حالت هر دو قسمت شیب و عمیق اسیدی (A/A) هستند. در این حالت گلوکز و لاکتوز هر دو تخمیر می‌شوند. این ویژگی برای کلیفرم‌های تخمیر کننده لاکتوز، مانند اشریشیا کلی و گونه‌های کلبسیلا-انتروباکتر صدق می‌کند.

علاوه بر واکنش‌های فوق، ممکن است واکنش‌های دیگری نیز در محیط کشت کلیگر آیرون آگار صورت گیرد. به عنوان مثال:

• تولید گاز: تولید گاز معمولا در فضای پایین لوله و وسط لوله ایجاد می‌شود. این به دلیل تولید گاز CO2 توسط ارگانیسم است.
• تولید H2S: سیاه شدن بخش عمیق محیط کشت KIA تولید سولفید هیدروژن (H2S) را نشان می‌دهد. باکتری‌های غیر تخمیرکننده لاکتوز و مولد سولفید هیدروژن، مانند گونه‌های سالمونلا، گونه‌های سیتروباکتر و گونه‌های پروتئوس، می‌توانند سبب ایجاد این پدیده شوند.

لوله‌های حاوی کلیگر آیرون آگار با چندین الگوی واکنش

A: اسید/اسید و تولید گاز

B: اسید/اسید و بدون گاز

C: قلیایی/اسیدی

D: قلیایی / اسیدی و تولید  H2

E: قلیایی / قلیایی

بررسی رفتار برخی از باکتری‌های مهم و رایج در محیط کشت KIA

همانطور که گفته شد، نتایج کشت ارگانیسم‌های مختلف در کلیگر آیرون آگار متفاوت است. در جدول 2 به بررسی بررسی رفتار برخی از باکتری‌های رایج در محیط کشت KIA پرداخته شده است.

جدول 2.برخی از باکتری‌های مهم و رایج در محیط کشت KIA