کیت رنگ آمیزی مالاشیت گرین 2 ویال زیست رویش Zist Royesh malachite green staining Kit

رنگ مالاشیت گرین

کیت رنگ آمیزی اسپور که نام دیگر آن کیت مالاشیت گرین (Malachite green) می باشد. مالاشیت گرین با فرمول شیمیایی C₂₃H₂₅ClN₂ (chloride) یک ترکیب آلی است و در واقع وجود اندوسپورها در کشت باکتریایی را می توان با این نوع رنگ آمیزی تشخیص داد.؛

هدف اصلی از رنگ آمیزی اسپور ها، تشخیص اسپورهای باکتریایی از سایر سلول های رویشی و تمایز اسپورها از فرم های غیر اسپور است.اسپورها فقط در باکتری هایی تولید می شوند که ژن های مخصوص اسپور زایی داشته باشند. اسپور زایی یک روش برای تشخیص و افتراق باکتری است.

سرطان‌زایی وتراتوژن بودن مالاشیت گرین در سالا 1991 توسط FDA تایید شد.

رنگ آمیزی اسپورها سخت دشوار است به همین دلیل از گرما استفاده می شود تا مالاشیت گرین بتواند به دیواره های اسپور با نفوذپذیری کم نفوذ کند. انواع مختلفی از مواد شیمیایی دیواره اسپور را تشکیل می دهند (پروتئین کراتین، کلسیم)، اما پپتیدوگلیکان در عمق دیواره قرار دارد. کراتین تشکیل دهنده قسمت بیرونی دیواره آندوسپور در برابر رنگ مقاومت می کند. در نتیجه گرم کردن سلول‌ها باعث می‌شود که دیواره اسپور نسبت به رنگ مالاشیت گرین نفوذپذیرتر شود و به پپتیدوگلیکان متصل شود. پس از رنگ گرفتن اسپور، رنگ مالاشیت گرین بیرون نمی‌آید زیرا دیواره اسپور با سرد شدن لکه، نفوذپذیری کمتری پیدا می‌کند.

پس از رنگ آمیزی گسترش با رنگ اولیه همراه با حرارت اشکال رویشی و اسپور باکتری ها هر دو سبز رنگ خواهند شد. عامل بی رنگ کننده در این رنگ آمیزی آب می باشد. زمانی که اسپور رنگ مالاشیت گرین را به خود می گیرد تحت تاثیر شستشو با آب آن را از دست نخواهد داد در حالیکه اجزا سلول رویشی پیوند بسیار ضعیفی با این رنگ بر قرار می کنند و به همین دلیل در اثر شستشو با آب سلول های رویشی رنگ سبز خود را از دست داده و بی رنگ می شوند. رنگ مخالف برای مشاهده هر چه بهتر گسترش اسپور مورد استفاده قرار می گیرد. در این رنگ آمیزی رنگ قرمز سافرانین به عنوان رنگ مخالف به کار می رود. سلول های رویشی که در مرحله رنگ بری رنگ خود را ازدست داده اند، رنگ مخالف را پذیرفته و قرمز رنگ می شوند و اسپورها همچنان به رنگ سبز باقی می مانند. در نتیجه وقتی سلول ها زیر میکروسکوپ مشاهده می شوند، دارای سه ویژگی هستند:

• سلول های رویشی (سلول باکتری) صورتی / قرمز (رنگ ثانویه) قابل مشاهده هستند.
• سلول های رویشی (سلول باکتری) حاوی اندوسپورها باید صورتی رنگ شوند و هاگ یا اندوسپور باید به صورت بیضوی سبز درون سلول ها دیده شود.
• اندوسپورهای بالغ و آزاد نیز نباید با باکتری های رویشی در ارتباط باشند و باید به صورت بیضوی سبز دیده شوند.

نکته :

در رنگ آمیزی گرم و اسید فست از الکل یا اسید الکل یا اسید بعنوان ماده رنگ بر استفاده می شود اما در رنگ آمیزی مالشیت گرین، تنها آب کافیست. زیرا:

• رنگ سبز مالاشیت در آب محلول است و نیز اتصال محکمی به دیواره سلول رویشی ندارد.
• چون سلول های رویشی در اثر گرما مختل شدند سبز مالاشیت به راحتی از آن ها شستشو داده شود.