کیت الایزا T-uptake پیشتاز طب 96 تستی ELISA PISHTAZ Teb T-uptake 96 test

T-uptake

غده تیروئید تحت تنظیم هورمون تیروتروپین، هورمونهای T3 و T4 را ترشح می کند، این هورمونها بصورت آزاد در گردش خون به مقدار ناچیزی وجود داشته و مقدار اعظم آنها بصورت باند با پروتئینهای حامل وجود دارند.

سه پروتئین با تمایل و ظرفیتهای متفاوت برای T3 و T4 شناخته شده اند که عبارتند از:

• TBG که 75-65 درصد از ظرفیت حمل هورمونهای تیروئیدی را به عهده دارد،
• آلبومین که کمترین تمایل به هورمونهای تیروئیدی را داشته ولی ظرفیت بالائی را دارا می باشد و 10 درصد از هورمون تیروکسین و 30 درصد از هورمون T3 در دسترس را حمل می کند.
• (TBPA (Thyroxine binding pre – albumin که 25- 15 درصد از ظرفیت حمل هورمونهای تیروئیدی را به عهده دارد.

از آنجائیکه پروسه متابولیسم کاملاً توسط فرم آزاد هورمونهای تیروئیدی تنظیم می گردد و این مقدار هورمونهای آزاد وابستگی کاملی با میزان ظرفیت پروتئینهای حامل آنها دارند، اندازه گیری میزان این پروتئینها اهمیت می یابد. تاکنون جهت اندازه گیری ظرفیت پروتئینهای حامل هورمون های تیروئیدی از روش های متعددی شامل روش: Silicates ، Ion – exchange و Denatured albumin استفاده شده است و یکی از جدیدترین و ساده ترین روشها روش الایزا بوده که دارای حساسیت مناسبی نیز می باشد.

اساس آزمایش :

اساس این آزمایش بر روش سنجش رقابتی استوار است به این ترتیب که چاهکهای پلیت با آنتی بادی ضد T4 پوشانده شده اند و در هنگام انجام آزمایش هورمون T4 به همراه T4 کنژوگه شده با آنزیم HRP و سرم به چاهکها اضافه میشوند در این هنگام پروتئینهای حامل هورمونهای تیروئیدی بر حسب ظرفیت خود مقداری از هورمون T4 را جذب مینمایند، ولی نمیتوانند با هورمون T4 کنژوگه واکنشی نشان دهند در نتیجه مقداری از T4 که جذب پروتئینهای حامل نگردیده است بر سر اتصال به آنتی بادیهای کف چاهک با هورمون T4 کونژوگه رقابت می نماید، بنابراین هر چه ظرفیت حمل پروتئینهای سرم بالاتر باشد مقدار T4 کمتری برای رقابت با T4 کنژوگه باقی مانده و در رقابت با آن در اتصال به آنتی بادیهای کف چاهکها تا موفق تر خواهد بود و بالعکس) ، پس از شستشو محلول سوبسترا به چاهکها اضافه میگردد که هر چه میزان رنگ زایی بیشتر باشد بیانگر بالاتر بودن میزان اتصال هورمون T4 کونژوگه بوده و این خود به این معنی است که مقدار T4 برداشت شده توسط پروتئینهای حامل بالا بوده بنابراین مقدار کمتری T4 برای رقابت باقی مانده است و بالعکس برای جلوگیری از فعالیت بیش از اندازه و نامناسب آنزیم ، محلول متوقف کننده افزوده می گردد که فعالیت آنزیم را مختل کرده و رنگ آبی را به زرد تبدیل می نماید که بهترین جذب نوری را در طول موج ۴۵۰ نانومتر دارد.